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Collagène, les fibrilles sont-elles disposées de manière superposée tout comme le tropocollagène ?

Collagène, les fibrilles sont-elles disposées de manière superposée tout comme le tropocollagène ?



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Les molécules de collagène (tropocollagène) sont liées en fibrilles, avec une structure en bandes montrant les espaces ("lacunes") entre les molécules. Les fibrilles à leur tour s'interconnectent-elles également de la même manière, ou les fibrilles s'étendent-elles d'un bout à l'autre des fibres ?


Espacements D de collagène dans les faisceaux de fibrilles

L'invention concerne des procédés et des systèmes de diagnostic d'une maladie osseuse ou d'un autre état lié au collagène chez un sujet. Celles-ci comprennent la fourniture d'un échantillon osseux du sujet et la détermination d'une valeur quantitative de morphologie du collagène de l'échantillon osseux. Une valeur de référence est fournie à partir d'un sujet témoin non affecté, la valeur de référence étant une valeur morphologique quantitative du collagène provenant du même type d'échantillon osseux obtenu à partir d'une population de sujets témoins non affectés. La valeur quantitative de la morphologie du collagène de l'échantillon osseux du sujet est comparée à la valeur de référence. Si la valeur morphologique du collagène est modifiée par rapport à la valeur de référence, le sujet est diagnostiqué comme ayant une maladie osseuse liée au collagène. La valeur de morphologie du collagène peut comprendre des espacements moyens de fibrilles et des distributions des espacements de fibrilles prélevés sur un échantillon d'os d'un sujet.


Investigations enzymatiques des structures extra-hélicoïdales et terminales du collagène

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Publié par ProQuest LLC (2017). Le droit d'auteur de la thèse est détenu par l'auteur.

Ce travail est protégé contre la copie non autorisée en vertu du titre 17, United States Code Microform Edition © ProQuest LLC.

789 East Eisenhower Parkway Boîte 1346

Je déclare par la présente t à la thèse suivante est basée sur des travaux effectués *y ne, que le

la thèse est sa propre composition, et aucune partie n'a été présentée auparavant pour un diplôme supérieur*

La recherche a été menée dans le

J'atteste par la présente que David Steer hrs a passé neuf terras engagés dans des travaux de recherche sous la direction de Ray, et qu'il a rempli

les conditions de l'ordonnance n°16 (St.Andrews), et qu'il est qualifié pour soumettre le

z thèse d'accompagnement pour le grade de docteur

Je me suis inscrit à l'Université de 3t. Andrews en octobre 1959, et a obtenu son diplôme d'Achelor of Science, Second Class Honours in Biochemistry, en juin 1963. Ma filiale

Tntreaction

États d'agrégation, la forme fibreuse b. et microscopie électronique

La structure primaire du collagène 12. L'effet des enzymes protéolytiques 30.

Résidus N-terminaux du collagène 33• La disponibilité de -lysyl amino 37.

Liaisons ^-glutamyl et ^-aspartyl b3. Composition Jubunit de collagène **5.

La réticulation du collagène 56.

1. Collagène soluble dans l'acide 6b.

(1) Enquêtes sur les 66. résidus N-terrain ou collagène soluble v

Isolement de D.3.P soluble dans l'eau. 67. acides aminés

(2) Enquêtes sur l'activité o^ 75. <x -amylase sur le collagène

Solubilisation du collagène mature par ^reatmont avec o< amylase

Préparation du collagène soluble par 76. traitement à l'amylase des insolubles

Teneur en glucides de l'amylase 76. Collagène solubilisé et normal

Dosage de l'activité protéolytique du 77. ensyme

Action de la pepsine sur l'amylase solubilisée 33. collagène

Fractionnement sur colonne d'amylase 3l. collagène solubilisé

Résidus H-terminaux de l'amylase 32. collagène solubilisé

Etude des 85. produits de bas poids moléculaire de l'amylase

(3) La disponibilité des résidus .-lysyle 33. Pinitrophénylation de 33 dénaturés par la chaleur.

Libération hydrolytique, destruction et 90. quantité totale ou R-D.H.P. lysine

Dinltrophénylation de l'hippuryl-lysine 93• Titrage de D.H.P. collagène 91*.

(M Expériences avec les péotides libérés de solubles et

collagène insoluble par l'enzyme collagène

Dinitrophénylation de peptides Analyses d'acides aminés

Séparation des peptides libres libérés par la collegenase

Dinitronhényle et fractionnement de la fraction peptidique P

3. Disponibilité des résidus ..-lysyle . expériences avec la collagénase

peptides libérés Résumé

Collagène

la classification est basée sur la structure secondaire,

collagène ayant un polypeptide triple heller 1 unique

"backbone0 assez différent de l'ex-I

e caractéristique de la plupart des pi'oteins (Fiich r-nd Crick 1961).

Composition en acides aminés de différents collagènes

l'hydroryproline compatible avec l'existence

du pli de collagène dans lequel ces acides aminés jouent

Dans la plupart des tissus collagènes, la majorité des

le collagène est très insoluble. D'habitude

la protéine peut être extraite par des procédures impliquant

solvants relativement doux, la quantité dépend de la

tissu concerné anti le solvant utilisé, donc avec

collagène de peau de veau et de peau de rat, extraction .ith

une solution saline diluée produit une fraction qui

Soluble

méthodes qui impliquent probablement la rupture de covalents

obligations, est considéré <s t e forme mature, et dans la plupart

tissus représente la carcasse de la

Collagène

fhe sterne trnpocollageo hrs veen utilisé pour désigner

la seule molécule de collagène* On pense que

collagène naturel, toujours présent dans un

forme fibreuse, se compose d'unités de tropocollagène

polymérisé par réticulation intemoléculaire. ainsi le

la limite de solubilité sera celle de la taille de l'agrégat,

certains des poly .©rs étant encore suffisamment petits pour

passer en solution. Cependant, il est considéré comme neutre

solutions de collagène solubles dans le sel et solubles dans les acides

contiennent principalement des monomères de tronocollngen, les premiers

se rapprochant le plus de la condition homogène,

de collagène de peau de lapin en solution lehnve sous forme de ro s rigide

de longueur U ) - 6 30°A et largeur 1 v3 - ? '^ Si cela

Un agrégat moyen

Tropocollagène

Collagène soluble dans le sel de ■Jcutrrl et soluble dans l'acide

collagène ont été proposés comme précurseurs o mature

collagène, cependant le r >le du collagène soluble dans l'acide dans

ce lien a été remis en cause par Harkness et.nl.

de (A1* glycine en collagène soluble dans un sel neutre que dans*

contre un mécanisme de ^om? tion de collagène tissulaire o<’

le forw,i* sel neutre lubla collagénacide soluble

entre les différentes formes de collagène soluble est

probablement pas un dur et rapide sur^ (Jac'/son et ' ontley

-19>0)" Il existe donc probablement un continu

molécules "orées et les plus facilement solubilisées, au

les plus anciens, partiellement polymérisés, qui sont dissous

avec une grande difficulté. Vu sous cet angle, le

les observations de Harkness peuvent s'expliquer par la

probabilité que le collagène soluble dans l'acide contienne un

proportion de molécules "plus anciennes" qui se sont échappées

Fibres de Lagan

existe dans la cornée où les feuilles

ibres sont posés om* sur l'autre avec leurs grains à

angles droits en I laminé st : c'ré (Gross 1961). *poule convenablement colorée et mélangée à l'électron

Microscope,

motif bandin. ?la technique o coloration positive

attache des ions de métaux lourds aux régions polaires de la

Fhospho

la distribution des chaînes d'aide basiques et acides

respectivement. Dans les deux cas, un rxial nerioJ d'environ

6bO°A est observé dans lequel 12 ou 13 bandes sont normalement

présent. Le plus important de ces h^s été appelé

Bancaire

par précipitation du collagène à partir d'une solution sous des conditions spécifiques

•) et '*-'i bfous

L'ancien

de longueur 2, ce dernier comme itros similaire à

L'interprétation largement acceptée de ces données.

est que tandis que dans m tive collagène, le tropocollagène

molécules ov rlrp par 6MnA$ en S*L« • agrège les

les molécules ne sont jointes que côte à côte et sont en

S'inscrire. Dans le .L.'. formes les molécules sont

attaché à la fois côte à côte et bout à bout, • ut là

n'y a pas de superposition, les molécules individuelles étant latéralement

dans le registre. ? ainsi la longueur du « L. • cristallite

est égal à la longueur de la molécule de trooocollagène,

et la péri'dicité o le .L. . est « oir tin-s que

de la fibre native. L'écart entre les

périodicité de .L.-. et la longueur totale du

molécule, peut le compte ou par l'acte que co-ryiel

molécules, se chevauchent ou "interlock" à leurs extrémités par

env. 3'. . ( ch'.itt st. al. 19 3, Tall otg 1953,

Hodge &. inclinaison ch 196'). Il a été suggéré ( ?c tker

<! Doty 195> et Hodge et ehmi^t 1953) ce terminal

refoulé ! Les apo -n es sont préoccupantes >d dans cette région de chevauchement.

par examen 0 ’ formes dimorphes dans lesquelles natif*

les fi rils de type ont été utilisés comme sites de nucléation pour

croissance ultérieure de .L. . cristallites, H dge ​​et

fchmitt 196 j a démontré la correspondance exacte 0*

bandes avec celles de m tive' ifcrlls avec reposé

par rapport à l'emplacement axial, mais pas par rapport à l'intensité.

type pntt- rn surgissent par sommation o ensembles o équivalent

bandes qui contribuent à l'intensité de la coloration par

en raison de leur apposition latérale dans le stsrgered

array*" I" il est accentué que les bauds sont ciné

uniquement à des régions polaires distinctes de la molécule

(Ftihn 19 o)) alors l'hypothèse de fhls exige que le

tropocollagen mrcronnleculo cen il a divisé en quatre

régions o' de longueur égale, chacune contenant un tot'1 de

environ. 12 sones polaires dont les positions axiales sont

identique.'1 dans chacun des ? quatre régions. Dans chaque molécule

il y aura un total de nppror. emplacements polaires,

éventuellement un aore si le peptide terminal se chevauche

contribuer à la remise du tout. rom acide aminé

analyses de collagène il y a environ 009 Acide et

chaînes latérales basiques, c'est-à-dire si tous les résidus polaires

sont impliqués dans la "ormetion des sones polaires ces

contiendrait un excédent de 12 suites polaires chacune (comme

voile est tout autre actus aminé présent). Seulement la moitié

de cette moyenne o** 12 résidus seront responsables de

l'intensité de la liaison à tout moment en fonction de

si la coloration concerne les résidus acides ou basiques

(le collagène contient environ, des nonnes égales) ers d'eci ic anc

contribution de chacun des trois polypeptides constitutifs

Eh'ins de tropocollagène> à

Il existe de bonnes preuves que ces trois chaînes pré

chimiquement distincts (se trouve 196 ?)> donc leur nrlmrry

la structure doit être telle que lorsqu'elle est assemblée en

triple-hellr, le résultat de nos 'nos équivalents s* ts de brids.

Si les trois chaînes sont impliquées dans la formation de

chaque ^endt le nombre de résidus polaires par main de

chaque chaîne fera la moyenne de 'notre. Si une seule chaîne est

en cause alors se pose la question de la distribution

des régions polaires entre les trois. Les

« la possibilité la plus proche est probablement la plus proche de l'état réel

d'une foire, pour tous les mmont o* les chaînes constitutives

de tropocoJLlrgon pourrait se produire initialement

entre les zones acides et basiques des polypeptides.

Cela expliquerait l'identité des bandes

résultant "rora les deux méthodes de coloration positive à savoir.

ou des groupes acides et basiques.

Tn la construction finale des fibres de la

tropocollagen uolecul sf il faut postuler

un processus en deux étapes. Les molécules ne pourraient pas polymériser !

par liaison de bout en bout grâce à l'interaction o le

peptides terminaux pour former des protofibrilles et ces ere

par la suite déplacé de 0,25 de leur parent de longue date

Évidemment pour expliquer l'el

Ctron

collagène ibres en terme o'* un quart décalé

organiser wnt un! une répartition ordonnée des polaires

locaux, nécessite une connaissance de l'organisation et de la structure du nmlec le à plusieurs niveaux.

Théories actuelles o4* protein bi sy thèse con compte

pour les m^st exigences spécifiques de sténose primaire

différences d'espèces 4c se produisent, btt1

Toujours ces résidus

dans des positions vitales !*ou la bonne

Fonction

Protéine^

Il est peu probable que les protéines soient synthétisées sous forme de

unités de poids moléculaire supérieur à environ 6

le poids raoleculnr ou chacun des trois constituants

chaînes de tropocollrgen est d'env. FAIRE,*) Ainsi il

il est probable que le collagène soit synthétisé à partir d'un nombre ou

d'unités su celles-ci ne peuvent pas être identiques car o le

dissemblance des trois chaînes de tropocollagone, et

aussi parce que les quatre équivalents ensembles

en position mais pas en intensité. Néanmoins, le

par rapport à l' espacement e oolaire résidu , • s

des bauds équivalents doivent exister, la perte de ces concepts étendus op 1évolution lochamique aussi ar?

f'r >n sous-unités qui bien que di fer att entendent un

relation mathématique à un

Un autre

expliquer 1 ut la biologie a probablement eu de plus grandes surprises

ou le biochimiste dans le passé.

Une tentative d'explication des micrographies électroniques de

Plus simple

Grant et. rl. (196*0. Soulignant qu'un

il a été démontré que l'arrangement échelonné sur un quart

ve théoriquement impossible dans un tridimensionnel

système où plus de deux molécules peuvent être mutuellement dans

contact (Gmith 1965) > ils suggèrent un

agrégation aléatoire basée sur l'alignement de ce qu'on appelle

« régions de liaison »> 1 dont cinq sont présentes dans le

longueur de chaque molécule de tronocollsgen.

Cette théorie ne peut pas seulement expliquer le SUo°A

péri dité o colleger^ positivement coloré c'est aussi

explique le motif obtenu avec une coloration négative

ce qui a été quelque chose de souvent embarrassant pour

protagonistes du système du "quartier décalé ». L'idée,

de Grant ot. Al. est-ce que la coloration négative Invol/es

rétention de netrl lourd dans un 'ora neutre dans le

régions d'emballage lâche o le matériau. Gégétivement

(stands) en alternance avec des bandes crk (b-ban s). Dans un !stance correspon lag à la longueur

il y a cinq bandes ©• et quatre b-bnnds. Le llrht

les zones correspondent à des régions de collage à forte teneur ©

d'acides anino-polaires c'est-à-dire par polaire et hy * rogcn

liaison, maintenez fermement ces parties de la molécule

ensemble. Dans ces brads il n'y aura pas de place 'ou

l'entrée de la molec est de souillure. A l'inverse le

les attaches parisiennes foncées sont des sones non collantes plus lâches

où il y a eu un accès facile pour la tache négative

support 'ou ce concept o" coloration négative c >31 s

des examens effectués par Grant sur glmtar* 1 an

collagène traité* Dans ce matériau la sis© une densité

de la bande a est augmentée tandis que les bandes b deviennent

moins distincte. On pense que cela est dû à des

lnt ©molecular crosslinks beln introduit par le

glutavaldchyde. Ainsi, une coloration négative reflète la

emballage moléculaire des fibres de collagène et des bières peu ou

aucun rapport avec les variations de cristallinité

au sein de molécules individuelles.

La longueur o*' les ©•bandes est d'env. 26 5° A et de

le b-ban?s 375 °A. alors que les molécules de collagène sont

agrégé dans ibrcs il y a un choix aléatoire quant à

quelle région bon inr d'une molécule réticule la

ban s est dans la région o' 6Uo°A,

Une périodicité sur ce

Un point intéressant soulevé était que le collagène

les molécules dans les préparations colorées négativement semblent

Bandes b.

Une hypothèse

donnant un mode d'agrégation essentiellement aléatoire, est

qu'il n'est pas nécessaire de postuler un processus en deux étapes

de la liaison de bout en bout en protofibrilles suivie de

Toutefois

ne stocke pas pour holn expliquer les 12 - 13 bandes dans le

6Vo^une période de collagène coloré positivement. Le seul

mention est que ces écartements caractéristiques voiture. être

considéré comme déterminé par un processus essentiellement aléatoire

o' agrégation d'unités de tropocollagène. Il apparaîtrait

être à nouveau nécessaire d'assumer la présence de quatre

ensembles équivalents de bandes et dans ce cas, ils seraient

être compatible avec le concept de la si'lultrne >us

Les analyses d'acides aminés ou de collagènes solubles donnent des résultats tout à fait reproductibles, tandis que le collagène naturel et le Jerlved

les gélatines ont tendance à donner des valeurs incohérentes, en raison sans doute

aux difficultés de purification des insolubles

protéines. Ainsi, des comparaisons fiables ont été possibles

seulement "'ou les analyses d'acides aminés de solu'le "crms de

les différences s'éclaircissent.

les premières analyses d'acides aminés ont été réalisées par

méthodes iscro-chéales et bien que ces techniques aient

^een obsolète 'ou quelque temps, les analyses oz C' itnall

et co orfeurs (Chifcnell 19-S) et "'devoir et carême (lf^+3)

ont certainement résisté à l'épreuve du temps. Échange de tonnes

chromatographie telle que développée par Moore et ''teln (19rl)

hrs a révolutionné les méthodes d'analyse des acides aminés et

les analyseurs automatiques modernes tas^d sur ce prindole

ont amélioré la vitesse et la précision des analyses

énormément* ast e (1955) usln^ l'original Toore et

technique teln, et publié des données actives sur la

une exposition aux acides aminés du collagène et des latins. Un grand

Résultat de

s mrsks d'azote d'amide dans la région t v de U5 du

chaînes latérales anioniques de l'acide rpastlc et de l'acide glutamique,

il y a un léger excès de groupements cationiques dans

le collagène' qui est donc une protéine légèrement basique.

*'ost valeurs pour le point iso électrique o' collagène se trouvent

entre pH7,5 - 3 ce qui serait en accord avec ce

concept. D'autres facteurs sont également pris en compte dans

évaluation des points électriques iao, y compris non covalents

interactions impliquant des groupes ionisables. ces

les interactions peuvent affecter la dissociation des groupes

préoccupations : Un autre facteur qui doit être pris en compte est

Grettle (1965) apporte la preuve que le vrai

le point isoélectrique du collagène n'est que juste au-dessus du pH 7 »

Cela pourrait être expliqué par la liaison d'anions, ou par

interactions impliquant I groupes asiques en excès d'acide

.7groupes. la courbe de titrage anormalement raide de

collagène dans la » région pHL - pH> r-tses la possibilité

de groupes masqués. nseulement une partie de la lysine semble ve

titré, donc la possibilité que certains d'entre eux soient

masqué doit être considéré (teinhardt et falser 19 5).

L'erture la plus intense de l'acide aminé

la composition du collagène est la forte proportion de glycine

an I o*' les acides imino. Hydroxy roline et hydroxylysine

hydroxy roline, mais sinon, ils ne sont pas sains dans aucune autre protéine couramment sécurisante. Il est généralement admis

*Le collagène hst ne contient ni tryptophane ni cystéine. Les

la teneur en tyrosine est très faible et a été suggérée par un adolescent

que cet acide aminé est confiné aux régions terminales o

la molécule ou à c 'val^ntly peptide attaché

apanages (Ho ge et. el. i960). Tic d'arginine et de glut

acii donnent probablement les valeurs les plus cohérentes pour

Différent

sources assez différentes leur montant semble

Bien que la teneur en glycine, proline et

l'hydroxyproline varie dans une certaine mesure, leurs quantités

composition o d'autres protéines. (ou collagène glycine

représente généralement env.

Une proline *

Numéro

caractéristique est une conséquence de l'unu ubI

Configuration de

les chaînes polypeptidiques du collagène. Glycine

les acides iminos ont tendance à déformer la normale ©rraigeaent de

os élevé car il est en collagène alors l'unique

con igurrtion connue sous le nom de

Collegen*fold

•pi « ’il ventre est bien large r ? ' <x

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-^CAfA AvO A*- O -4 3 <f r-CA C**. CA CM <M r-CM w— CM A O-4

CAVOCO CM CO CO CAtpvO ACMO <hh*T-to UAA

CMCv-C0ChAv—Cs».tx*CM-4'CM'^? ca^4 AtO'O -4'1

CO *-CM <A CM O CM w- CM t- CM A r-

CM A COO v- O CA A v- A-r- A A AO* A-4 O Ch-4r-A !>CMav

# * ♦ OC^OOCMOOOCM O PA-^iACO UAO -4 CM CJO O

Ch -4 *— A >* CM At-CM r-CM

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H H X © 53 « H «>>oq«riqu© rH o o q q e 43 « h <4 *o o 3 Jh o *o e un boe-* « h

<a © >>xjk x*h q q q

La teneur en hydr x^proline

environ • lb tandis que o reptiles se trouve être tv fr

1 .? - 9,3 poisson fourmi 5,3 - 7,9 . Cakehashi et Tasiakr

(1953) ont montré que la température de seuil 4 ou

La stabilité hy rotherual o' collagènes varie également, de

6 - 7oa< ^ou mam collagènes extraterrestres à 33 • Ia5°C

Pour le froid

• après "lsh. Ils proposent que les deux « acteurs soient

en relation. ustrvson (1951 ) a soutenu ces vues,

suggérant que l'hydroxyle

Grouper

Impliqué dans la liaison d'hydrogène? t donnant lieu au supplément

Thermique

cet acide aminé. Plus de studios rétractés par Pies et Gross

(19^^), y compris des analyses précises des collagènes 4roa

un large éventail d'animaux ont ho/jamais, conduisent le a à

conclure qu'il s'agit plutôt de la teneur totale en acides imino

que la teneur en hyiroxyprollne qui détermine la

degré de stabilité de la protéine. Le déterminant

facteur aurait donc dû être *ne de configuration

tn autre que le montant o hy ro en bond i ng •

Astbury (19^ ), en se fondant sur des conclusions chimiques

données et les st oics de diffraction des rayons X ont proposé que le

c "lagon ^olocule est composé de répétitions de la

Séquence - P - 1 -

et un o' la bobine restante u s). chrohcnl elle et.

à K© la séquence trioeptlde unique la plus importante,

fixation fréquente sur toute la longueur de la molécule.

y attaquer la chaleur ertnt ur <1 collagène avec trypsine et

analysant les 11^ peptides résultants, Grass iann et. Al.

(1Q6p) a déduit qu'en tant que /5 ème une seule exception, le

peptides contenaient tous env. ' de leurs acides aminés

comme la glycine, cet acide aminé est distribué uniformément à travers

les observations rheoe résument les aspects les plus importants

o' structure primaire de collagène, mais * qu'ils sont vrais pour

la molécule entière est sujette au doute, comme cela a été sho^n

par d'autres travaux. Schroeder et. Al. (1953 *>nd 19? ) et

Couronne

Et 1955)

peptides obtenus par hydrolyse acide et 1asique contrôlée

de collagène, la composition de certains d'entre eux est indiquée

Tableau 2.

Totolygad, .sqUam

L xaUttn*.

.m ^anrcLr.

-2EJ1U "hr Glr "cl C-ly Glu Oly

Pro Chr Gly Pro Ala Gly Gly Gly Pro Glu Gly Alo

Gly Pro Gly Ala Hypro Gly I J? Glu Hypro Gly

Il est évident que la glycine est souvent liée via son

dipeptide - Gly - Pro - In feet semble être une séquence très fréquente. "le groupe carboxyle de

la nroline est liée à un acide aminé autre que la glycine dans

plusieurs peptides, et l'un des dipeptides isolés

avait la structure * gly - glv -. Ces observations

pris ensemble montrent que la séquence * G * P - ft - de

Aatbury ne peut pas être la règle. Cette séquence fait cependant

représentent 33 * 35 l®r*t de la structure primaire

selon les résultats de Grassmann et. el. (19>1),

et doit donc être un élément structurel important

Séquences peptidiques de quatre ou cinq résidus

ne contenant pas de glycine ont été trouvés (Hannig et 'lord wig

196 ?) donc les hypothèses que la glycine se répète dans chaque

thlri position, rnd est réparti uniformément à travers le

molécule ne peut être que partiellement vraie.

^une telle preuve indirecte de l'existence o polar

et régions apolaires Dans le collagène, les h^s proviennent d'électrons

microscope studiest et bJlhn (1969) ont montré de façon concluante

que les bandes de coloration sombre donnant la caractéristique

etriationa croisée de fibres de collagène positivement jtalées

contiennent une concentration d'acides aminés acides et basiques,

La première preuve chimique est venue lorsque Grassmnnn et. Al.

(1957' ont isolé six peptides de longueur de chaîne allant de 13.

montrer que sur l'ensemble des zones qui wer*> riches en proline

et l'hydroxyproline étaient dépourvus d'acides aminés polaires et

collagène triple-enfer^ est composé de région contenant

une prépondérance de n acides aminés n-polaires (cristallins

régions) alternant avec éventuellement non hélicoïdales ou seulement

régions légèrement hélicoïdales avec un

chaînes latérales (n sones morphous), "he régions cristallines

On pense qu'ils sont constitués en grande partie de glycine et de l'imino

-comme en somme son importance majeure.

Grassmann a souligné que des zones d'une trentaine

acides aminés qui sont complètement dépourvus de groupes polaires

peut représenter des unités répétitives macro qui pourraient être

associé à un seul tour du collagène complet

helir (par opposition aux hélices individuelles de trois

chaînes polypeptidiques constitutives). autre produit chimique

Vanehan

composition:-Ale - Fro (Gly3 Al"2 GIU2 Asp2 i h"2 Thr) Fro • composition:-Ale

et Gly - Fro (Gly/ Ala^ Val ? . eup Lys^ OIU2 Asp. ihe

Les zones entre parenthèses sont d'accord avec l'idée de

Polaire

maison des analyses pepti© les plus détaillées à ce jour

,Tsing hautement purifié, sans chymotrypsine - trypsine, ils

ig©3tGd 62gae" roeollagen qui avait été dénaturé à

Période*

37° rn 1 trftriaetrlcalement. hnly

C-terUn-arginine fin lysine a été trouvé, et d'après le titrage eta Il est apparu que 6 des liaisons impliquant ces

Ce hetle env.

16o peptidfs de longueur de chaîne moyenne devraient e obtenu

I • oolec dnr poids de 3 -» collagène.

Les peptides ont été séparés par oreperetive continue

électrophorèse, chro:mtograpby lon-chaque,

chromatographie auto-oléculaire et papier c r

Msatographie,

JJ peptidtfd, Parmi ceux-ci

peptf t 55 remplit tous les critères pour homo it r, 51

dont '©sont soumis à un dosage quantitatif d'acide minier

analyse, 13 à :analyse ruxp,

études. Les résultats du groupe final et < séquentiel

analyses de certains des n ptl-

Dee est spectacle

Dans l'interprétation de ces résultats, Grassnann

et. al* étendre l'hypothèse de l'alternance pol? r rnd

régions apolaires, ajoutant que les sones polaires peuvent être

Arroser

grande quantité de leurs preuves doivent venir

pourcentage 'igurec pour les champs imino et les acides polaires $ ilno

Des 51 peptides analysés, pour les séquences réelles

__ je /m Sraao.uq auU

Te!xU Al§r

1. Toler Peptides sans proline

azi HGlyAspGluGlyiyLys 3 Gly, ?hr, 2 Glu, Asp

eptides contenant pr >line hydrx'oxyprolino.

H"Jly-(-ly,3er,2 Asp, ilu)"*2 Mo, Glu, 13 3p, I -Zrr-OH

1* h -Slu-|12 Gly 2 Al- , ier,Leu-Asp- ' an, Jlu j/.sp-'tf.

T71’ iZ:>y’( Hy’ '®r»'?,lu»-' 1 ' *7/1*2 er,2*Asp^2*Glul 2L^g -

10 Pro,2 yPro,13 Gl$-Lys OH ly

Hily.CCly,Ala, ? xlu,Asp)"9 Ala,3 al, Leu,2

5 i o, ?ypro, l r.lf -Ly 0 er,2 7rl,. sp,2 ±u. J - ry

!>ProJ Hypio,l Gly,7 Ale r)-2 Val, eu,2 Phe,3 er,

3 Fr&# 34>,' Hypro.r Ay,o Ala

3 Val, 2 Leu,fhe, 7

les plus longs peptides qui se libèrent o acides imino /©re o

longueur de chaîne 21 et 22 résidus peptide o’ 13 nmho

acides et une séquence* de 13 acides aminés en pepti e

catégorie, i'he imino acid ree sones représentait ly le

quatre longs peptides ne représentent que 2,7 o- la protéine

rsolecule. Aucun ptides ere isolé ron c'est "hich

portait « reo d'acides aminés polaires.

Parmi les p:ptides qui ont été scrutés pour l'acide aaino

séquence ( ee Tableau 3 la plupart des régions c ntain d à w^ich peut

être attribué un caractère polaire ou apolaire. Non

des informations sont disponibles sur la manière dont ces

les peptides s'emboîtent ou de l'ordre o : les acides aminés

dans le reste des peoti ies (la majeure partie dans

la plupart des cas). La plupart des zones polaires de peptides tondues

dans le tableau 3 contiennent des acides aminés acides plutôt que basiques

et la question se pose du nombre de ces

qui sont présents sous forme d'asparagine ou de glutamine certains de ces

les zones peuvent ne pas être vraiment sans polart rrthcr o imino celts.

Que les régions polaires existent ne peut pas être contesté, mais le

les preuves chimiques à ce jour ne sont pas suffisantes pour

des informations sur leur fréquence ou leur distribution, ro it

est difficile de tirer des inclusions concernant les théories

pour les motifs de bandes obtenus avec des micrographies électroniques.

?l'enzyme collagénase a été utilisée pour

montré t ' t l'enzyme ( laisse le 1 me -r-.-G- - •*' -r? P » proline, G * Glycine et X un autre résidu qui

dans le collagène Est généralement de l'hydroxyproline ou de l'allanln

(?*ich*-els et. ale 1953, fa al rn ?à-r 19*9, Grassm*nn

et* el. 19*9, Cchrohenloher et. Al. 19*9, Fin du galop

del ter 1962). Ainsi, la digestion de la collrgénase entraîne la

'ormation d'un grand nombre de di et tri peptides

contenant de la glycine et de la proline, nrigin* ting de la

les zones apolaires de la molécule, ainsi que les peptides plus gros

dérivé des régions polaires. ranzblau et. Al. (196M

isolé ces plus gros peptides par dialyse et par

chromatographie sur Sephade* G*2

ces peptides non di&lysables obtenus à partir de différents

collagènes ont révélé des similitudes de base et un modèle de

acides aminés assez différents de celui du collagène intact*

Ainsi la fraction non dialysable ( ee ta 1 : ) a

acide glutamique augmenté, acide aspartique et lysine, contient

la majorité des glucides, de l'acide éthylique et de la tyrosine| mais

a des quantités réduites d'acides imino-arglnine et de leucine.

On s'attendrait à ce que la collagénase n'attaque que

régions non polaires du molcculo où^ le meilleur salut

proportions de glycine et de proline se produisent, et que le

la fraction non colorante doit donc être composée

largement o* des peptides des zones polaires résiduelles. le sien

ne peut pas être tout à fait vrai cependant, parce que la prétendue

colorant avec de l'acide phosphorique tungstique, réactif spécifique de la prrinine et de l'lstidine, étant facilement lavé

résidus de lysine. Ainsi, les régions polaires de l'électron

fBieroseopist sont riches en arginine tandis que les non-dlrlysshle

indiquant qu'il ne peut y avoir d'identité de base entre

Fsaa atlfitraU

Fch A9&S.

CAamaalMon

(Comme raaldues/l vrais lues).

Xcthyocol ifihblt kin Cal' Skin

5 Vi ---— —. ■. ———3.2 La fraction non dialysable a un hi h conton* de réactif

chaînes latérales, en particulier l'acide rsnartlc et glut ante aci : • Que l'hexose peut être lié à ^ne de ces résidus dans certains

est une possibilité comme la majorité des heyose de

de cette portion p ptid©, est également compatible avec la théorie selon laquelle inter et intro moléculaire

Réticuler un

toute autre modi ication covalente de la molécule sera • ?>

'utlor et Cunnin.hara (1965) ont isolé un

glycopeptide de la peau de cobaye collagène l'amino

dont la composition en acide (tableau ) indique qu'il

est de nature hautement olaire. Leurs résultats suggèrent

que le herose est hound via un -O-^lycosldie sur I à

i ?\_.Qly.saE 16 ,er qiri C'-wnindian .126,

Acide aminé. . r. JrftQBtntion 1. . Eranf.caU'in Hyiroxylysine

désul :s exprimé en rapport à l'hy rxylysine.

Peptides libérés du letlyocol par collagunsse

ont été étudiés par Green'erg et. Al. (196)

en utilisant la technique de dégradation .. dman sur l'entlro

digestion enzymatique. ’>y suivant le curs© o l’enzyme

Hydrolyse avec un pi stat

hbviousv un grand nua' er o les peptides s 411 r 111

PepVde sieste des produits de collagènes complets

la digestion de l'Icthyocol n'a observé que 3 - e taches inites.

Les résultats de la d * une dégradation ont montré que la glycine I

N'est-ce pas une fourmi dans les positions 1 et , la proline dans

position 2 et hy ru yproline en position 3« ee to* le 6.

, XLi-dasaLj :-Ifi. ' (En tant que résidus par VM dans le résumé)

Amino cidj Position T|Position II Position III Position IV 1 *1

voici une certaine quantité de glycine en position III

preuve hr peptides o 'le orn -C- -G-. Cependant, sur

concept que la séquence -.-p- - <oris le nost cocon

l'hydroryprolinc se trouve en position ITT '-sût être considéré comme présentant une éclnite caractéristique de la

Rnino

séquence o collagène. Bien que la r.lanine soit portée en abondance

thf-n hyiroyyproline Dans le collagène, et est un résidu commun

dans les régions non polrr, il est moins fréquent que n

hyfroyyproline en position TIT.

Ainsi, deux traits indiscutables du primaire

structure ou' collagène hr ve venir à la lumière. 1. Le

requenev du <11 peptide - lycine - proline *t si le

observation de Grassmann 1961 qui explique

35 o la molécule est acceptée, puis 9' o la proline

de collagène est dans cet arrangement, et il n'y a pas

question d'une distribution aléatoire de cet acide aminé.

2. la proportion élevée d'hydroyyproline dans le troisième

p- En dehors de ces deux observations, l'image de

la structure primaire du collagène émergeant de

informations obtenues à ce jour, est l'un des

h<térogénéité. La chaîne polypeptidique peut être divisée en

des régions polaires et cristallines distinctes à l'intérieur de la

ormères, la séquence d'acides aminés semble être assez

Aléatoire. 'il résulte de' Crassmann et. Al. (196) montrer

que dans les régions polaires les acides rmia^ polaires

eux-mêmes sont disposés d'une manière non ordonnée particulière.

sones pour correspondre au modèle de Vandins de l'électron

micrographies o' collagène. C'est difficile à expliquer,

considering th« spread of polar residues in the polar

Banding

is in fact a representation at the level of one a lino

acid restlue. If for example, collagen stained with

uronyl acetate is considered: there are approximately 75

side chains which will bind this stain in each o' the

constituent chains of tropocollagen (1 OO amino acids

Glutamic

glutamine and aspara ine). The banding pattern reed res

the presence o s nothing like 5'1 positions at which stain

is bound in the length o the molecule. Thus 3 x 75 * 22$

re s must give rise to Jb bru-s. /1th a proportion

bends arising ron tw or more aci ic or basic groups rt

a tine, as a result o either: (1) cl-^se proximity of

polar residues in the polypeptide giving no resolution o ‘

bands corresponding t each o^ them and (ii) the presence

or polar residues in corresponding positions on the

three constituent chains of tropocollagea? a so

non-staining o s me o t>e polar side chains due to

involvement in inter and intra-molt cola r ionic,

proportion or the banding pattern -.111 be due to single polar groups# This concept silovs for an essentially

random distribution of acidic

And *sslc

Involves a lower degree organisation of the so-called

polar regions, this is perhaps 'nore In keeping with the

present state of knowledge of the primary structure of

Collagen Is re larkaMo for its resistance to

proteolytic attack, only the highly apact ic enzyme

collagen' se brings about any large scale destruction

of th- molecule. There h-8 b-en a great deal o'

conjecture as to whether or not proteinases in general

hove any activity with collagen. 1 uhn et. Al. (19 >1)

maintained that trypsin degrades only tyrosine-containing

iopurities and that the collagen molecules remain

unchanged. Conversely Hodge et. Al. (i960) reported

that when soluble tropocollagen is treated with

proteolytic enzymes, extra-helical peptide *openiages

rre released which they term telopeptides. Concurrent

ith the release o telopeptldea, the interactions of

the molecule are moci*’ier thus Ibrous-Ion/-spacing

a/greg?tes can no Ion er bo formed but the ability to

om segm nt-long-s oacin» crystallites is unimpeire .

ubin et. ale (1963) cemonstrrte^ that pepsin liberates terminal or near terminal covalently

bon ed-peptides the amino acid composition o which is

quite di?'rerent ron that oc the residual major portion

0“ the molecule. hey observed that pepsin c inverts

m - r1 th < r! j I o(c'rw ‘ s, .• .<< 1 T . r

that the inter chain link Is external to the body o the

Grant find Album (196 ) showed that rat tall tendon

collagen coni be solu’ilised at p-i 7*L in the presence

o calcium salts or sallcllates by a variety o enzymes

including trypsin an 5 ehymotrypsin. Other chemicals

which eoul be present in in-vivo conditions e.g.

arginine an creatinine, enhanced this sola ilisation.

he significance of such in ings is di fic lit to

asses?, or rat-tail tendon colleger? is an unusually

soluble orm. However collagen is normally quite

insoluble at neutral pHs, so the solubilisation observed

in this work could be due to telop ptlde liber tion and

subsequent separation into -chains at the temperature

of the exp-rim nt (33°C) I.e. a combination o proteolysis

A picture o *

"hairy-rod", i.e. carryin a number o protru in: p< ptlde

chains hrs been put orward by ?oamus et. Al. (i960).

hey suggest that there are at least 1? places where

peptide chains 0 low molocular weight are sticking out

rrom the molecule, and that these chains are o ten almost

identical in amino acid sequence.

Thus the majority o inf motion is in avour o '

the concept that proteolytic enzymes find points of

attack in pepti e app-on ares o collagen> whilst the

main body of the triple-heliy is resistin’ to proteases,

suggest that the peptide appen ages mi ht be important

in connection with cr ssI Inking and end to en polymerisa

tion interactions of tropocollagen molecules.

Pretreatment with the enzyme <X -amylase at

has been used as a method for the solubilisation of

ox-hide collagen (Nishihara 19>3)* -teven (1961 ■) has

used the technique to extract collagen ron human

connective tissue and suggests that the enayoe destroys

covalent linkages which stabilise connective tissue

:owes and foss (19 3) and Grassoann anct Horaano

Aminé

(anger's

procollngen nowes and Moss foun. small anouns of

initrophenyl (D. ’•?•) aspartic acl end . ,!J. . alanine

which they thought must arise from extraneous matter, not

representing true terminal groups,

found significant amounts of K-teminrl residues in

Solub o

Aoles/1900

Aspartic Acid and D,#,P, Glycine of which D,?i.P. Glycine

represented 31 using the ,N,P, technique with procollng-n

Chan rarejan and Hose (1965)» using the phenyl

isothiocyanate nethod, found l.lo moles aspartic acid

• nd .^3 ool glycine per 1000 moles amino acl in

similar amounts o’ the same amino acids in insoluble

teven and Tristram (1962), by hydrolysing the

entire reaction mixture after dinitrophenylaMon of acid

soluble collagen, obtained D. P.

Derivatives of

Ino acids (

procedure would detect the N-terminal

Residues

which would otherwise le removed, by ./ashing o the . protein after dinitrophenylatlon. It was suggested that

these H-terminal derivatives originate from a collagen

non-protein nitrogen fraction which is not removed from

the material by normal purification procedures. C'était

found that the non-protein nitrogen could be more or less

completely removed by acetone precipitation or dialysis

at low pH, and It was postulated that the fraction was

Important in connection with the fibre forming interactions

:&Ue ?♦ rtapUtfl .rasVaaa .t, .-alaUft ■..^W an*

( rom Steven and Trlstra- 19 -2)

Just how ma iy K-ter linel residues are present in

collagen is rs much of a question no r ns It was ten years

ago. The non-proteIn-nitrogen fraction of teven and

obeerved by the numerous workers who have investigated this problem. Phe fairly constant amounts of

rlyclne and b.r2.P. aspartic acid observed by h3f lann et.nl

could easily bolon to bound peptides which are impossible

to remo e from the parent protein, no covalent linkages

Hermann et. Al. do not comment on the oi ni icance

' ' ■ .1 mol. ' • <x ' ' ^1. of amino acid residues, beyond saying that it is only

one tenth oc that expected if one amino end group occured

in each o** the three peptide chains of collagen. Sur le

basis of etermin tions of acetyl groups present in

collagen in act, they propose that the peptide chains

of collagen consist o' an average of siv subunits, whose

* mlno end groups are acetylated.

they could detect no end groups in insoluble college*,

but alkali treatm nt liberated amounts similar to those

they had estimated in soluble collagen* They took this

to indicate that the N-terminal residues of insoluble

collagen are masked by herose, and actually isolated end

characterised a glycopeptide from insoluble collagen

containin galactose and glucose. Again there was no

attempt to rrtlonalise the low yield of N-terminal amino

per molecular weight. Possibly th only logical

explanation^ i" it is assumed that glycine end aspartic

’•cid are present as terminal residues in the amounts

stated, and that the theories for the molecular weight

and subunit composition o'* collagen are accurate is

that the terminal residues if collagen are masked at

some stage subsequent to its 1ioaynthesis, possibly by

an enzymatic process, and that this larking is either

not always comolete or occurs over s relatively long

period of time co that in any preparation there are bound

t c y? mol cj1-s ' r e : ’1 : - r u s.

^isJ^ii&LUUz J2__ '.-Iral xiQuaa__ x-sjitaurtia*

A ’undauntal problem In 'he chemistry of collagen

are not ell equivalent that some of them rre not free t->

react with substituting reagents, while the majority can.

This question hrs come to light as a result of studies

usinr the dinitrophenyl technique on anger, mostly in

conjunction with investi ations of N-terminal residues as

described above, owes and Moss (1953) in th* ir

erneriments reported that V of the lysvl residues

appeared to not be avails'le to substitution by 1. laoro

2,b linitro ©nzeno ( ,D,M, • ) the rearent us d in tle

D.u,F, technique of Banker ( an er 19' 5). La réaction

medium used in this case was 70 ethanol plus Lh

saturated sodium bicarbonato, at room temperature*

Several forms of collagen and gelatin were investigated

• ut in no case did the degree o ' substitution exceed

70 . These workers pointed out that in the case of

gelatin and formic acid treated colleger., the D.f.P.

derivatives wore soluble, so the low < egr e or

substitution observe! cannot he due to a low rate of

reaction with an insoluble substrate. However they were

only able to detect a small amount o'* lysine in their

hy rol cates (V moles/10 0 amino acids) loavin approx,

1 moles/lT'h amino acid residues unaccounted or. Ce

was put forward V at -D.Tf.P. lysine Is iuc> less stal l

to acid hy rrlysis when combined In c llogen than then

present ns the free amino acid or In another ■ • .P.

hther workers to report incomplete substitution of

-lysyl groups were Holomons and Irving (1973) who

obtained 30 recovery of - . .r. lysine anI Hallsworth

(197k) v’ho quoted percentage aval labilities o k -7

for differ nt types o collagen aggregate, using

corrections based on hydrolytic recoveries of

lysine o'* B3.b - 94.9 ‘ as determined by control

experiments, hallsworth was also able to show that under

his conditions of reaction viz. aqueous medium pH 7.b

and 37°C, the degree o substitution was proportional

Mechanic and Lovy (1979) isolated the trln^ptl e

LL H - (glycyl- <*- ' - lysf.no r ' ^vl • > ’ v

ten'on. They postulated that the of lysine reported

to b© unassailable to • .K. • by Bowes and Hose 1953

may be present as J lysyl p ptides o this nature.

’owever It is a known act that un or certain conditions

o by rolysis peptide synthesis an J rearran ement can

occur, so it must ■ e considered unlikely that this p ptide

occurs in such large amounts if at all.

of the lysine of collagen Is substituted by . . . d»en the reaction is carried out in & denaturing medium

2.5H with respect to sodium perchlorate. The degree of

substitution was determined by separation of the basic

amino acids from the hydrolysate of the D.M.s. protein

on a column of amherlite 1 C5 • he results are given

fa-le 3. rom Hormann et. Al. 196J.

Analysis of basic amino acids 'rom normal and dlnitrophenylate soluble and Insoluble Collagen. Yields in mol./l > iol. acide aminé.

di nitrophenyl a ted d ired 2.5

asolu’ la Collagen. ■ ).O3 0. 7

d 1 nl t rophe ny 1 a t ed undenatured.

denatured HaCl 0.1" 0.1) 0.12 5.35

Heyns and /ol "f (195‘S) also suggest that with excess

bicarbonate an, denaturantc -lysyl residues o collagen

become more or less completely substitute'. Beaucoup d'autres

workers h -ve recorded a whole range o" availabilities

a variety of reagents, for . lysyl residues. Leach (1966)

rives vislues or substitution b potassium cyrnate

from bo * 99 and VJ - 93 resp ctlvely. Harding (1966)

in a very complete survey of the subject gives data on

reactivity of l-lysyl groups to many reagents including

1-acetylation, ' enzoylation, benzenesulphonylation,

succinylatlon, guani inrtion, so lum bromoacetate,

2, k dinitro benzene, nitrous acid, nitr^syl c dori e, ninbyrin rnd trypsin. The figures vary enormously hut

some are very hi -h including 100 ‘or acetylation.

In the race of this wealth of information, one must

conclude that the -lysyl groups of collagen

region of 100 free or substitution reactions. Peut-être

In native collagen, some steric hindrance or ionic bonding

prevents complete reaction with some reagents, but in most

cases this can be overcome by denaturetion or increasing

the molarity of the solution. The act that ionic

strength hrs such an effect on reaction of ..-lysyl

resi ues with .T.H. could incicrt© th't this orm of

m( aking is in fact due to ionic bonding of these residues

rather than a purely steric ef. act and that th©

observations In connection with denaturing agents could

also arise ’rom a simple increase in ionic strength causing

the enhanced availability.

The orperiments used in estlm? tiny, the reactivity of

-lysyl groups, in general ere not sufficiently sensitive

two ner molecule) -lysyl groups In covrlent llnkeges. These, whilst few in number, could bo highly importantF r features o the molecule* Thus the tri pen

Tide o"

Mechanic and Levy cannot te completely ruled out.

’’ranxblau (1962) produced evidence in favour o' the idea,

when he found that 12 o the lysine of a colla&enrs©

igest o 1< 1, is not free to react with . j

masking in such small p ptides is unlikely to be anything but covalent, although here egain ionic linkages could

Contradictoire

this theory came from the work of Hormann

they actually estimated the free lysine in hynrolysetes

o T.N.P. collagen. Their figure of only . 'nl./l

mol. amino acid (see Table 3) corresponds to 2.1 lysine

Residues

3001*' <), so the hypothesis is not completely ruled out,

although of course this tiny ©mount

Have originated i rom

Lockhart and Abraham (1956), reported that -lysyl

peptides are extremely stable to acid by rolyais, having

^ound that on ^3 hrs. hydrolysis with 11 • MCI

At 3'^C

There was

Aspartic acid from an

-lysyl peptide o' the two amino acids. This could be a

special case the proximity of two free carboxyl groups

to the peptide bonds would tend to repel protons and

.4 characteristic o all -lysyl peptide bonds. However, if this stability is a property o' all

-lysyl

estinrtions of free lysine in hydrolysates of I .f.P.

proteins would be subject to considerable errors, and the

results o experiments sue as those

Of Horman

would be misleading* This is only a remote possibility,

The possibilities or covalent linkages Involving

Numerous*

hypothesis for crosslinkin: between the polypeptide

chains o collagen, by N-glycosyl linked carbohy rrte

residues taking on the *orm of a Schl f-base, and thought

that tho . amino group of lysine would form the amino

group donors in this system.

Harding

Possible

structures in which the & amino groups o lysine could

participate se igure 1. He pointed ou that in the

letter case (straight chain li) the lysine residue

e-tlons Into the ^-terminal amino /cids or collagen. Cette

is not completely true: with Sa iger’s technique the

lysine, which is a er soluble. he derivative o' lysine

-lysyl bon I would be the unusual

Possible hhkAggs wok/mj £-li^i txtrnwo ^rpu^S ,

CO— CH—NH--- — CO- Jh«nh2brtn&h ArtrA IS tirrrurtAL X

CH — CO---NW- CH — Co---NH — C.W — Co&H

NH rco - r

HH2- OH-CO---NW - CH— Co---NH-Crt-CoOW

6) M —CH — co--- NH&K^)— ”*NH---CH’NH^

C'li^ hh^CH-Co ----UH-CtHj), Cii'W--- Nrt CH'CcM

lysine would almost certainly escape detection in the

aqueous nhase of an analysis of a I.K.P. protein

hydrolysate, due to the large excers v

which would also be present.

_______ 'UnKMia*

Bl arable number o X * glutamyl

Collagène

Al. (1957) ©s a result o experiments using the thiohydmt In

méthode. The Investigations were n:*t quantitative but were

taken o indicate the pr A

Rearrangement

O( B d land

proprlonlc acids respectively. In the gelatin obtained rom lchtyocol, the formation o' these compounds wa3 noted

as well ns a decrease in glutamic acid and aspartic acid,

an the tor nation o' succinic seiial lehy e and ammonia. '

criticism o this work was thet the anhydrous med1 urn used

coul-i promote ring closure by the o carboxyl groupst with

Su (1962) and ransbli

[ Prom GaMojo 0^ • 14&O-)

e0__ Mont aw/flc2o

je ---CCrl^') n gsl'e.riPiCtu't’ion

CcHx) n. ---> CC1r/) m je kO*C 30m»n. NR - CH- co - NH

R.

C’H 2. 1 CH 2

hy irorauic acids from unoo i led proteins In aq eous conditions. Using water soluble 1 - cycloheyyl - 3

C - >rph n/1 * (' ) et’ •>> * c” ' Mil il c

o-toluone sulphonate at pH** and 25°C in an aqueous

medium, they suggested that there

Aurait

Leur

O peptide

Pris en considération

0< ?00 ’ rsi^? s V'' : >u . if' n polypep I I rsw&c^* I’U'^ovl r rt •

linkages, the reactions and equilibria in cigur© 3 ®1<I

be ©rived un or certain conditions. Curtis and : pikes

(1962) have shown that carlolmi .es catalyse the oration

of peptide linkages without themselves bein involved., and

so th© glutsrimide ring system could be formed in this

fashion, fristram also re erred to work ty 1ovecs et.

Al. (1953) on the Hofmann degradation o polyanhydro

aspartic acid, which showed that this polymer opens to

X - glutamyl linkages ere present in c

substantial numbers, rs ^ranablsu suggests, then the two methylene groups Introduced into the polypentide