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Les molécules de collagène (tropocollagène) sont liées en fibrilles, avec une structure en bandes montrant les espaces ("lacunes") entre les molécules. Les fibrilles à leur tour s'interconnectent-elles également de la même manière, ou les fibrilles s'étendent-elles d'un bout à l'autre des fibres ?
Espacements D de collagène dans les faisceaux de fibrilles
L'invention concerne des procédés et des systèmes de diagnostic d'une maladie osseuse ou d'un autre état lié au collagène chez un sujet. Celles-ci comprennent la fourniture d'un échantillon osseux du sujet et la détermination d'une valeur quantitative de morphologie du collagène de l'échantillon osseux. Une valeur de référence est fournie à partir d'un sujet témoin non affecté, la valeur de référence étant une valeur morphologique quantitative du collagène provenant du même type d'échantillon osseux obtenu à partir d'une population de sujets témoins non affectés. La valeur quantitative de la morphologie du collagène de l'échantillon osseux du sujet est comparée à la valeur de référence. Si la valeur morphologique du collagène est modifiée par rapport à la valeur de référence, le sujet est diagnostiqué comme ayant une maladie osseuse liée au collagène. La valeur de morphologie du collagène peut comprendre des espacements moyens de fibrilles et des distributions des espacements de fibrilles prélevés sur un échantillon d'os d'un sujet.
Investigations enzymatiques des structures extra-hélicoïdales et terminales du collagène
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Publié par ProQuest LLC (2017). Le droit d'auteur de la thèse est détenu par l'auteur.
Ce travail est protégé contre la copie non autorisée en vertu du titre 17, United States Code Microform Edition © ProQuest LLC.
789 East Eisenhower Parkway Boîte 1346
Je déclare par la présente t à la thèse suivante est basée sur des travaux effectués *y ne, que le
la thèse est sa propre composition, et aucune partie n'a été présentée auparavant pour un diplôme supérieur*
La recherche a été menée dans le
J'atteste par la présente que David Steer hrs a passé neuf terras engagés dans des travaux de recherche sous la direction de Ray, et qu'il a rempli
les conditions de l'ordonnance n°16 (St.Andrews), et qu'il est qualifié pour soumettre le
z thèse d'accompagnement pour le grade de docteur
Je me suis inscrit à l'Université de 3t. Andrews en octobre 1959, et a obtenu son diplôme d'Achelor of Science, Second Class Honours in Biochemistry, en juin 1963. Ma filiale
Tntreaction
États d'agrégation, la forme fibreuse b. et microscopie électronique
La structure primaire du collagène 12. L'effet des enzymes protéolytiques 30.
Résidus N-terminaux du collagène 33• La disponibilité de -lysyl amino 37.
Liaisons ^-glutamyl et ^-aspartyl b3. Composition Jubunit de collagène **5.
La réticulation du collagène 56.
1. Collagène soluble dans l'acide 6b.
(1) Enquêtes sur les 66. résidus N-terrain ou collagène soluble v
Isolement de D.3.P soluble dans l'eau. 67. acides aminés
(2) Enquêtes sur l'activité o^ 75. <x -amylase sur le collagène
Solubilisation du collagène mature par ^reatmont avec o< amylase
Préparation du collagène soluble par 76. traitement à l'amylase des insolubles
Teneur en glucides de l'amylase 76. Collagène solubilisé et normal
Dosage de l'activité protéolytique du 77. ensyme
Action de la pepsine sur l'amylase solubilisée 33. collagène
Fractionnement sur colonne d'amylase 3l. collagène solubilisé
Résidus H-terminaux de l'amylase 32. collagène solubilisé
Etude des 85. produits de bas poids moléculaire de l'amylase
(3) La disponibilité des résidus .-lysyle 33. Pinitrophénylation de 33 dénaturés par la chaleur.
Libération hydrolytique, destruction et 90. quantité totale ou R-D.H.P. lysine
Dinltrophénylation de l'hippuryl-lysine 93• Titrage de D.H.P. collagène 91*.
(M Expériences avec les péotides libérés de solubles et
collagène insoluble par l'enzyme collagène
Dinitrophénylation de peptides Analyses d'acides aminés
Séparation des peptides libres libérés par la collegenase
Dinitronhényle et fractionnement de la fraction peptidique P
3. Disponibilité des résidus ..-lysyle . expériences avec la collagénase
peptides libérés Résumé
Collagène
la classification est basée sur la structure secondaire,
collagène ayant un polypeptide triple heller 1 unique
"backbone0 assez différent de l'ex-I
e caractéristique de la plupart des pi'oteins (Fiich r-nd Crick 1961).
Composition en acides aminés de différents collagènes
l'hydroryproline compatible avec l'existence
du pli de collagène dans lequel ces acides aminés jouent
Dans la plupart des tissus collagènes, la majorité des
le collagène est très insoluble. D'habitude
la protéine peut être extraite par des procédures impliquant
solvants relativement doux, la quantité dépend de la
tissu concerné anti le solvant utilisé, donc avec
collagène de peau de veau et de peau de rat, extraction .ith
une solution saline diluée produit une fraction qui
Soluble
méthodes qui impliquent probablement la rupture de covalents
obligations, est considéré <s t e forme mature, et dans la plupart
tissus représente la carcasse de la
Collagène
fhe sterne trnpocollageo hrs veen utilisé pour désigner
la seule molécule de collagène* On pense que
collagène naturel, toujours présent dans un
forme fibreuse, se compose d'unités de tropocollagène
polymérisé par réticulation intemoléculaire. ainsi le
la limite de solubilité sera celle de la taille de l'agrégat,
certains des poly .©rs étant encore suffisamment petits pour
passer en solution. Cependant, il est considéré comme neutre
solutions de collagène solubles dans le sel et solubles dans les acides
contiennent principalement des monomères de tronocollngen, les premiers
se rapprochant le plus de la condition homogène,
de collagène de peau de lapin en solution lehnve sous forme de ro s rigide
de longueur U ) - 6 30°A et largeur 1 v3 - ? '^ Si cela
Un agrégat moyen
Tropocollagène
Collagène soluble dans le sel de ■Jcutrrl et soluble dans l'acide
collagène ont été proposés comme précurseurs o mature
collagène, cependant le r >le du collagène soluble dans l'acide dans
ce lien a été remis en cause par Harkness et.nl.
de (A1* glycine en collagène soluble dans un sel neutre que dans*
contre un mécanisme de ^om? tion de collagène tissulaire o<’
le forw,i* sel neutre lubla collagénacide soluble
entre les différentes formes de collagène soluble est
probablement pas un dur et rapide sur^ (Jac'/son et ' ontley
-19>0)" Il existe donc probablement un continu
molécules "orées et les plus facilement solubilisées, au
les plus anciens, partiellement polymérisés, qui sont dissous
avec une grande difficulté. Vu sous cet angle, le
les observations de Harkness peuvent s'expliquer par la
probabilité que le collagène soluble dans l'acide contienne un
proportion de molécules "plus anciennes" qui se sont échappées
Fibres de Lagan
existe dans la cornée où les feuilles
ibres sont posés om* sur l'autre avec leurs grains à
angles droits en I laminé st : c'ré (Gross 1961). *poule convenablement colorée et mélangée à l'électron
Microscope,
motif bandin. ?la technique o coloration positive
attache des ions de métaux lourds aux régions polaires de la
Fhospho
la distribution des chaînes d'aide basiques et acides
respectivement. Dans les deux cas, un rxial nerioJ d'environ
6bO°A est observé dans lequel 12 ou 13 bandes sont normalement
présent. Le plus important de ces h^s été appelé
Bancaire
par précipitation du collagène à partir d'une solution sous des conditions spécifiques
•) et '*-'i bfous
L'ancien
de longueur 2, ce dernier comme itros similaire à
L'interprétation largement acceptée de ces données.
est que tandis que dans m tive collagène, le tropocollagène
molécules ov rlrp par 6MnA$ en S*L« • agrège les
les molécules ne sont jointes que côte à côte et sont en
S'inscrire. Dans le .L.'. formes les molécules sont
attaché à la fois côte à côte et bout à bout, • ut là
n'y a pas de superposition, les molécules individuelles étant latéralement
dans le registre. ? ainsi la longueur du « L. • cristallite
est égal à la longueur de la molécule de trooocollagène,
et la péri'dicité o le .L. . est « oir tin-s que
de la fibre native. L'écart entre les
périodicité de .L.-. et la longueur totale du
molécule, peut le compte ou par l'acte que co-ryiel
molécules, se chevauchent ou "interlock" à leurs extrémités par
env. 3'. . ( ch'.itt st. al. 19 3, Tall otg 1953,
Hodge &. inclinaison ch 196'). Il a été suggéré ( ?c tker
<! Doty 195> et Hodge et ehmi^t 1953) ce terminal
refoulé ! Les apo -n es sont préoccupantes >d dans cette région de chevauchement.
par examen 0 ’ formes dimorphes dans lesquelles natif*
les fi rils de type ont été utilisés comme sites de nucléation pour
croissance ultérieure de .L. . cristallites, H dge et
fchmitt 196 j a démontré la correspondance exacte 0*
bandes avec celles de m tive' ifcrlls avec reposé
par rapport à l'emplacement axial, mais pas par rapport à l'intensité.
type pntt- rn surgissent par sommation o ensembles o équivalent
bandes qui contribuent à l'intensité de la coloration par
en raison de leur apposition latérale dans le stsrgered
array*" I" il est accentué que les bauds sont ciné
uniquement à des régions polaires distinctes de la molécule
(Ftihn 19 o)) alors l'hypothèse de fhls exige que le
tropocollagen mrcronnleculo cen il a divisé en quatre
régions o' de longueur égale, chacune contenant un tot'1 de
environ. 12 sones polaires dont les positions axiales sont
identique.'1 dans chacun des ? quatre régions. Dans chaque molécule
il y aura un total de nppror. emplacements polaires,
éventuellement un aore si le peptide terminal se chevauche
contribuer à la remise du tout. rom acide aminé
analyses de collagène il y a environ 009 Acide et
chaînes latérales basiques, c'est-à-dire si tous les résidus polaires
sont impliqués dans la "ormetion des sones polaires ces
contiendrait un excédent de 12 suites polaires chacune (comme
voile est tout autre actus aminé présent). Seulement la moitié
de cette moyenne o** 12 résidus seront responsables de
l'intensité de la liaison à tout moment en fonction de
si la coloration concerne les résidus acides ou basiques
(le collagène contient environ, des nonnes égales) ers d'eci ic anc
contribution de chacun des trois polypeptides constitutifs
Eh'ins de tropocollagène> à
Il existe de bonnes preuves que ces trois chaînes pré
chimiquement distincts (se trouve 196 ?)> donc leur nrlmrry
la structure doit être telle que lorsqu'elle est assemblée en
triple-hellr, le résultat de nos 'nos équivalents s* ts de brids.
Si les trois chaînes sont impliquées dans la formation de
chaque ^endt le nombre de résidus polaires par main de
chaque chaîne fera la moyenne de 'notre. Si une seule chaîne est
en cause alors se pose la question de la distribution
des régions polaires entre les trois. Les
« la possibilité la plus proche est probablement la plus proche de l'état réel
d'une foire, pour tous les mmont o* les chaînes constitutives
de tropocoJLlrgon pourrait se produire initialement
entre les zones acides et basiques des polypeptides.
Cela expliquerait l'identité des bandes
résultant "rora les deux méthodes de coloration positive à savoir.
ou des groupes acides et basiques.
Tn la construction finale des fibres de la
tropocollagen uolecul sf il faut postuler
un processus en deux étapes. Les molécules ne pourraient pas polymériser !
par liaison de bout en bout grâce à l'interaction o le
peptides terminaux pour former des protofibrilles et ces ere
par la suite déplacé de 0,25 de leur parent de longue date
Évidemment pour expliquer l'el
Ctron
collagène ibres en terme o'* un quart décalé
organiser wnt un! une répartition ordonnée des polaires
locaux, nécessite une connaissance de l'organisation et de la structure du nmlec le à plusieurs niveaux.
Théories actuelles o4* protein bi sy thèse con compte
pour les m^st exigences spécifiques de sténose primaire
différences d'espèces 4c se produisent, btt1
Toujours ces résidus
dans des positions vitales !*ou la bonne
Fonction
Protéine^
Il est peu probable que les protéines soient synthétisées sous forme de
unités de poids moléculaire supérieur à environ 6
le poids raoleculnr ou chacun des trois constituants
chaînes de tropocollrgen est d'env. FAIRE,*) Ainsi il
il est probable que le collagène soit synthétisé à partir d'un nombre ou
d'unités su celles-ci ne peuvent pas être identiques car o le
dissemblance des trois chaînes de tropocollagone, et
aussi parce que les quatre équivalents ensembles
en position mais pas en intensité. Néanmoins, le
par rapport à l' espacement e oolaire résidu , • s
des bauds équivalents doivent exister, la perte de ces concepts étendus op 1évolution lochamique aussi ar?
f'r >n sous-unités qui bien que di fer att entendent un
relation mathématique à un
Un autre
expliquer 1 ut la biologie a probablement eu de plus grandes surprises
ou le biochimiste dans le passé.
Une tentative d'explication des micrographies électroniques de
Plus simple
Grant et. rl. (196*0. Soulignant qu'un
il a été démontré que l'arrangement échelonné sur un quart
ve théoriquement impossible dans un tridimensionnel
système où plus de deux molécules peuvent être mutuellement dans
contact (Gmith 1965) > ils suggèrent un
agrégation aléatoire basée sur l'alignement de ce qu'on appelle
« régions de liaison »> 1 dont cinq sont présentes dans le
longueur de chaque molécule de tronocollsgen.
Cette théorie ne peut pas seulement expliquer le SUo°A
péri dité o colleger^ positivement coloré c'est aussi
explique le motif obtenu avec une coloration négative
ce qui a été quelque chose de souvent embarrassant pour
protagonistes du système du "quartier décalé ». L'idée,
de Grant ot. Al. est-ce que la coloration négative Invol/es
rétention de netrl lourd dans un 'ora neutre dans le
régions d'emballage lâche o le matériau. Gégétivement
(stands) en alternance avec des bandes crk (b-ban s). Dans un !stance correspon lag à la longueur
il y a cinq bandes ©• et quatre b-bnnds. Le llrht
les zones correspondent à des régions de collage à forte teneur ©
d'acides anino-polaires c'est-à-dire par polaire et hy * rogcn
liaison, maintenez fermement ces parties de la molécule
ensemble. Dans ces brads il n'y aura pas de place 'ou
l'entrée de la molec est de souillure. A l'inverse le
les attaches parisiennes foncées sont des sones non collantes plus lâches
où il y a eu un accès facile pour la tache négative
support 'ou ce concept o" coloration négative c >31 s
des examens effectués par Grant sur glmtar* 1 an
collagène traité* Dans ce matériau la sis© une densité
de la bande a est augmentée tandis que les bandes b deviennent
moins distincte. On pense que cela est dû à des
lnt ©molecular crosslinks beln introduit par le
glutavaldchyde. Ainsi, une coloration négative reflète la
emballage moléculaire des fibres de collagène et des bières peu ou
aucun rapport avec les variations de cristallinité
au sein de molécules individuelles.
La longueur o*' les ©•bandes est d'env. 26 5° A et de
le b-ban?s 375 °A. alors que les molécules de collagène sont
agrégé dans ibrcs il y a un choix aléatoire quant à
quelle région bon inr d'une molécule réticule la
ban s est dans la région o' 6Uo°A,
Une périodicité sur ce
Un point intéressant soulevé était que le collagène
les molécules dans les préparations colorées négativement semblent
Bandes b.
Une hypothèse
donnant un mode d'agrégation essentiellement aléatoire, est
qu'il n'est pas nécessaire de postuler un processus en deux étapes
de la liaison de bout en bout en protofibrilles suivie de
Toutefois
ne stocke pas pour holn expliquer les 12 - 13 bandes dans le
6Vo^une période de collagène coloré positivement. Le seul
mention est que ces écartements caractéristiques voiture. être
considéré comme déterminé par un processus essentiellement aléatoire
o' agrégation d'unités de tropocollagène. Il apparaîtrait
être à nouveau nécessaire d'assumer la présence de quatre
ensembles équivalents de bandes et dans ce cas, ils seraient
être compatible avec le concept de la si'lultrne >us
Les analyses d'acides aminés ou de collagènes solubles donnent des résultats tout à fait reproductibles, tandis que le collagène naturel et le Jerlved
les gélatines ont tendance à donner des valeurs incohérentes, en raison sans doute
aux difficultés de purification des insolubles
protéines. Ainsi, des comparaisons fiables ont été possibles
seulement "'ou les analyses d'acides aminés de solu'le "crms de
les différences s'éclaircissent.
les premières analyses d'acides aminés ont été réalisées par
méthodes iscro-chéales et bien que ces techniques aient
^een obsolète 'ou quelque temps, les analyses oz C' itnall
et co orfeurs (Chifcnell 19-S) et "'devoir et carême (lf^+3)
ont certainement résisté à l'épreuve du temps. Échange de tonnes
chromatographie telle que développée par Moore et ''teln (19rl)
hrs a révolutionné les méthodes d'analyse des acides aminés et
les analyseurs automatiques modernes tas^d sur ce prindole
ont amélioré la vitesse et la précision des analyses
énormément* ast e (1955) usln^ l'original Toore et
technique teln, et publié des données actives sur la
une exposition aux acides aminés du collagène et des latins. Un grand
Résultat de
s mrsks d'azote d'amide dans la région t v de U5 du
chaînes latérales anioniques de l'acide rpastlc et de l'acide glutamique,
il y a un léger excès de groupements cationiques dans
le collagène' qui est donc une protéine légèrement basique.
*'ost valeurs pour le point iso électrique o' collagène se trouvent
entre pH7,5 - 3 ce qui serait en accord avec ce
concept. D'autres facteurs sont également pris en compte dans
évaluation des points électriques iao, y compris non covalents
interactions impliquant des groupes ionisables. ces
les interactions peuvent affecter la dissociation des groupes
préoccupations : Un autre facteur qui doit être pris en compte est
Grettle (1965) apporte la preuve que le vrai
le point isoélectrique du collagène n'est que juste au-dessus du pH 7 »
Cela pourrait être expliqué par la liaison d'anions, ou par
interactions impliquant I groupes asiques en excès d'acide
.7groupes. la courbe de titrage anormalement raide de
collagène dans la » région pHL - pH> r-tses la possibilité
de groupes masqués. nseulement une partie de la lysine semble ve
titré, donc la possibilité que certains d'entre eux soient
masqué doit être considéré (teinhardt et falser 19 5).
L'erture la plus intense de l'acide aminé
la composition du collagène est la forte proportion de glycine
an I o*' les acides imino. Hydroxy roline et hydroxylysine
hydroxy roline, mais sinon, ils ne sont pas sains dans aucune autre protéine couramment sécurisante. Il est généralement admis
*Le collagène hst ne contient ni tryptophane ni cystéine. Les
la teneur en tyrosine est très faible et a été suggérée par un adolescent
que cet acide aminé est confiné aux régions terminales o
la molécule ou à c 'val^ntly peptide attaché
apanages (Ho ge et. el. i960). Tic d'arginine et de glut
acii donnent probablement les valeurs les plus cohérentes pour
Différent
sources assez différentes leur montant semble
Bien que la teneur en glycine, proline et
l'hydroxyproline varie dans une certaine mesure, leurs quantités
composition o d'autres protéines. (ou collagène glycine
représente généralement env.
Une proline *
Numéro
caractéristique est une conséquence de l'unu ubI
Configuration de
les chaînes polypeptidiques du collagène. Glycine
les acides iminos ont tendance à déformer la normale ©rraigeaent de
os élevé car il est en collagène alors l'unique
con igurrtion connue sous le nom de
Collegen*fold
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-^CAfA AvO A*- O -4 3 <f r-CA C**. CA CM <M r-CM w— CM A O-4
CAVOCO CM CO CO CAtpvO ACMO <hh*T-to UAA
CMCv-C0ChAv—Cs».tx*CM-4'CM'^? ca^4 AtO'O -4'1
CO *-CM <A CM O CM w- CM t- CM A r-
CM A COO v- O CA A v- A-r- A A AO* A-4 O Ch-4r-A !>CMav
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Ch -4 *— A >* CM At-CM r-CM
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H H X © 53 « H «>>oq«riqu© rH o o q q e 43 « h <4 *o o 3 Jh o *o e un boe-* « h
<a © >>xjk x*h q q q
La teneur en hydr x^proline
environ • lb tandis que o reptiles se trouve être tv fr
1 .? - 9,3 poisson fourmi 5,3 - 7,9 . Cakehashi et Tasiakr
(1953) ont montré que la température de seuil 4 ou
La stabilité hy rotherual o' collagènes varie également, de
6 - 7oa< ^ou mam collagènes extraterrestres à 33 • Ia5°C
Pour le froid
• après "lsh. Ils proposent que les deux « acteurs soient
en relation. ustrvson (1951 ) a soutenu ces vues,
suggérant que l'hydroxyle
Grouper
Impliqué dans la liaison d'hydrogène? t donnant lieu au supplément
Thermique
cet acide aminé. Plus de studios rétractés par Pies et Gross
(19^^), y compris des analyses précises des collagènes 4roa
un large éventail d'animaux ont ho/jamais, conduisent le a à
conclure qu'il s'agit plutôt de la teneur totale en acides imino
que la teneur en hyiroxyprollne qui détermine la
degré de stabilité de la protéine. Le déterminant
facteur aurait donc dû être *ne de configuration
tn autre que le montant o hy ro en bond i ng •
Astbury (19^ ), en se fondant sur des conclusions chimiques
données et les st oics de diffraction des rayons X ont proposé que le
c "lagon ^olocule est composé de répétitions de la
Séquence - P - 1 -
et un o' la bobine restante u s). chrohcnl elle et.
à K© la séquence trioeptlde unique la plus importante,
fixation fréquente sur toute la longueur de la molécule.
y attaquer la chaleur ertnt ur <1 collagène avec trypsine et
analysant les 11^ peptides résultants, Grass iann et. Al.
(1Q6p) a déduit qu'en tant que /5 ème une seule exception, le
peptides contenaient tous env. ' de leurs acides aminés
comme la glycine, cet acide aminé est distribué uniformément à travers
les observations rheoe résument les aspects les plus importants
o' structure primaire de collagène, mais * qu'ils sont vrais pour
la molécule entière est sujette au doute, comme cela a été sho^n
par d'autres travaux. Schroeder et. Al. (1953 *>nd 19? ) et
Couronne
Et 1955)
peptides obtenus par hydrolyse acide et 1asique contrôlée
de collagène, la composition de certains d'entre eux est indiquée
Tableau 2.
Totolygad, .sqUam
L xaUttn*.
.m ^anrcLr.
-2EJ1U "hr Glr "cl C-ly Glu Oly
Pro Chr Gly Pro Ala Gly Gly Gly Pro Glu Gly Alo
Gly Pro Gly Ala Hypro Gly I J? Glu Hypro Gly
Il est évident que la glycine est souvent liée via son
dipeptide - Gly - Pro - In feet semble être une séquence très fréquente. "le groupe carboxyle de
la nroline est liée à un acide aminé autre que la glycine dans
plusieurs peptides, et l'un des dipeptides isolés
avait la structure * gly - glv -. Ces observations
pris ensemble montrent que la séquence * G * P - ft - de
Aatbury ne peut pas être la règle. Cette séquence fait cependant
représentent 33 * 35 l®r*t de la structure primaire
selon les résultats de Grassmann et. el. (19>1),
et doit donc être un élément structurel important
Séquences peptidiques de quatre ou cinq résidus
ne contenant pas de glycine ont été trouvés (Hannig et 'lord wig
196 ?) donc les hypothèses que la glycine se répète dans chaque
thlri position, rnd est réparti uniformément à travers le
molécule ne peut être que partiellement vraie.
^une telle preuve indirecte de l'existence o polar
et régions apolaires Dans le collagène, les h^s proviennent d'électrons
microscope studiest et bJlhn (1969) ont montré de façon concluante
que les bandes de coloration sombre donnant la caractéristique
etriationa croisée de fibres de collagène positivement jtalées
contiennent une concentration d'acides aminés acides et basiques,
La première preuve chimique est venue lorsque Grassmnnn et. Al.
(1957' ont isolé six peptides de longueur de chaîne allant de 13.
montrer que sur l'ensemble des zones qui wer*> riches en proline
et l'hydroxyproline étaient dépourvus d'acides aminés polaires et
collagène triple-enfer^ est composé de région contenant
une prépondérance de n acides aminés n-polaires (cristallins
régions) alternant avec éventuellement non hélicoïdales ou seulement
régions légèrement hélicoïdales avec un
chaînes latérales (n sones morphous), "he régions cristallines
On pense qu'ils sont constitués en grande partie de glycine et de l'imino
-comme en somme son importance majeure.
Grassmann a souligné que des zones d'une trentaine
acides aminés qui sont complètement dépourvus de groupes polaires
peut représenter des unités répétitives macro qui pourraient être
associé à un seul tour du collagène complet
helir (par opposition aux hélices individuelles de trois
chaînes polypeptidiques constitutives). autre produit chimique
Vanehan
composition:-Ale - Fro (Gly3 Al"2 GIU2 Asp2 i h"2 Thr) Fro • composition:-Ale
et Gly - Fro (Gly/ Ala^ Val ? . eup Lys^ OIU2 Asp. ihe
Les zones entre parenthèses sont d'accord avec l'idée de
Polaire
maison des analyses pepti© les plus détaillées à ce jour
,Tsing hautement purifié, sans chymotrypsine - trypsine, ils
ig©3tGd 62gae" roeollagen qui avait été dénaturé à
Période*
37° rn 1 trftriaetrlcalement. hnly
C-terUn-arginine fin lysine a été trouvé, et d'après le titrage eta Il est apparu que 6 des liaisons impliquant ces
Ce hetle env.
16o peptidfs de longueur de chaîne moyenne devraient e obtenu
I • oolec dnr poids de 3 -» collagène.
Les peptides ont été séparés par oreperetive continue
électrophorèse, chro:mtograpby lon-chaque,
chromatographie auto-oléculaire et papier c r
Msatographie,
JJ peptidtfd, Parmi ceux-ci
peptf t 55 remplit tous les critères pour homo it r, 51
dont '©sont soumis à un dosage quantitatif d'acide minier
analyse, 13 à :analyse ruxp,
études. Les résultats du groupe final et < séquentiel
analyses de certains des n ptl-
Dee est spectacle
Dans l'interprétation de ces résultats, Grassnann
et. al* étendre l'hypothèse de l'alternance pol? r rnd
régions apolaires, ajoutant que les sones polaires peuvent être
Arroser
grande quantité de leurs preuves doivent venir
pourcentage 'igurec pour les champs imino et les acides polaires $ ilno
Des 51 peptides analysés, pour les séquences réelles
__ je /m Sraao.uq auU
Te!xU Al§r
1. Toler Peptides sans proline
azi HGlyAspGluGlyiyLys 3 Gly, ?hr, 2 Glu, Asp
eptides contenant pr >line hydrx'oxyprolino.
H"Jly-(-ly,3er,2 Asp, ilu)"*2 Mo, Glu, 13 3p, I -Zrr-OH
1* h -Slu-|12 Gly 2 Al- , ier,Leu-Asp- ' an, Jlu j/.sp-'tf.
T71’ iZ:>y’( Hy’ '®r»'?,lu»-' 1 ' *7/1*2 er,2*Asp^2*Glul 2L^g -
10 Pro,2 yPro,13 Gl$-Lys OH ly
Hily.CCly,Ala, ? xlu,Asp)"9 Ala,3 al, Leu,2
5 i o, ?ypro, l r.lf -Ly 0 er,2 7rl,. sp,2 ±u. J - ry
!>ProJ Hypio,l Gly,7 Ale r)-2 Val, eu,2 Phe,3 er,
3 Fr&# 34>,' Hypro.r Ay,o Ala
3 Val, 2 Leu,fhe, 7
les plus longs peptides qui se libèrent o acides imino /©re o
longueur de chaîne 21 et 22 résidus peptide o’ 13 nmho
acides et une séquence* de 13 acides aminés en pepti e
catégorie, i'he imino acid ree sones représentait ly le
quatre longs peptides ne représentent que 2,7 o- la protéine
rsolecule. Aucun ptides ere isolé ron c'est "hich
portait « reo d'acides aminés polaires.
Parmi les p:ptides qui ont été scrutés pour l'acide aaino
séquence ( ee Tableau 3 la plupart des régions c ntain d à w^ich peut
être attribué un caractère polaire ou apolaire. Non
des informations sont disponibles sur la manière dont ces
les peptides s'emboîtent ou de l'ordre o : les acides aminés
dans le reste des peoti ies (la majeure partie dans
la plupart des cas). La plupart des zones polaires de peptides tondues
dans le tableau 3 contiennent des acides aminés acides plutôt que basiques
et la question se pose du nombre de ces
qui sont présents sous forme d'asparagine ou de glutamine certains de ces
les zones peuvent ne pas être vraiment sans polart rrthcr o imino celts.
Que les régions polaires existent ne peut pas être contesté, mais le
les preuves chimiques à ce jour ne sont pas suffisantes pour
des informations sur leur fréquence ou leur distribution, ro it
est difficile de tirer des inclusions concernant les théories
pour les motifs de bandes obtenus avec des micrographies électroniques.
?l'enzyme collagénase a été utilisée pour
montré t ' t l'enzyme ( laisse le 1 me -r-.-G- - •*' -r? P » proline, G * Glycine et X un autre résidu qui
dans le collagène Est généralement de l'hydroxyproline ou de l'allanln
(?*ich*-els et. ale 1953, fa al rn ?à-r 19*9, Grassm*nn
et* el. 19*9, Cchrohenloher et. Al. 19*9, Fin du galop
del ter 1962). Ainsi, la digestion de la collrgénase entraîne la
'ormation d'un grand nombre de di et tri peptides
contenant de la glycine et de la proline, nrigin* ting de la
les zones apolaires de la molécule, ainsi que les peptides plus gros
dérivé des régions polaires. ranzblau et. Al. (196M
isolé ces plus gros peptides par dialyse et par
chromatographie sur Sephade* G*2
ces peptides non di&lysables obtenus à partir de différents
collagènes ont révélé des similitudes de base et un modèle de
acides aminés assez différents de celui du collagène intact*
Ainsi la fraction non dialysable ( ee ta 1 : ) a
acide glutamique augmenté, acide aspartique et lysine, contient
la majorité des glucides, de l'acide éthylique et de la tyrosine| mais
a des quantités réduites d'acides imino-arglnine et de leucine.
On s'attendrait à ce que la collagénase n'attaque que
régions non polaires du molcculo où^ le meilleur salut
proportions de glycine et de proline se produisent, et que le
la fraction non colorante doit donc être composée
largement o* des peptides des zones polaires résiduelles. le sien
ne peut pas être tout à fait vrai cependant, parce que la prétendue
colorant avec de l'acide phosphorique tungstique, réactif spécifique de la prrinine et de l'lstidine, étant facilement lavé
résidus de lysine. Ainsi, les régions polaires de l'électron
fBieroseopist sont riches en arginine tandis que les non-dlrlysshle
indiquant qu'il ne peut y avoir d'identité de base entre
Fsaa atlfitraU
Fch A9&S.
CAamaalMon
(Comme raaldues/l vrais lues).
Xcthyocol ifihblt kin Cal' Skin
5 Vi ---— —. ■. ———3.2 La fraction non dialysable a un hi h conton* de réactif
chaînes latérales, en particulier l'acide rsnartlc et glut ante aci : • Que l'hexose peut être lié à ^ne de ces résidus dans certains
est une possibilité comme la majorité des heyose de
de cette portion p ptid©, est également compatible avec la théorie selon laquelle inter et intro moléculaire
Réticuler un
toute autre modi ication covalente de la molécule sera • ?>
'utlor et Cunnin.hara (1965) ont isolé un
glycopeptide de la peau de cobaye collagène l'amino
dont la composition en acide (tableau ) indique qu'il
est de nature hautement olaire. Leurs résultats suggèrent
que le herose est hound via un -O-^lycosldie sur I à
i ?\_.Qly.saE 16 ,er qiri C'-wnindian .126,
Acide aminé. . r. JrftQBtntion 1. . Eranf.caU'in Hyiroxylysine
désul :s exprimé en rapport à l'hy rxylysine.
Peptides libérés du letlyocol par collagunsse
ont été étudiés par Green'erg et. Al. (196)
en utilisant la technique de dégradation .. dman sur l'entlro
digestion enzymatique. ’>y suivant le curs© o l’enzyme
Hydrolyse avec un pi stat
hbviousv un grand nua' er o les peptides s 411 r 111
PepVde sieste des produits de collagènes complets
la digestion de l'Icthyocol n'a observé que 3 - e taches inites.
Les résultats de la d * une dégradation ont montré que la glycine I
N'est-ce pas une fourmi dans les positions 1 et , la proline dans
position 2 et hy ru yproline en position 3« ee to* le 6.
, XLi-dasaLj :-Ifi. ' (En tant que résidus par VM dans le résumé)
Amino cidj Position T|Position II Position III Position IV 1 *1
voici une certaine quantité de glycine en position III
preuve hr peptides o 'le orn -C- -G-. Cependant, sur
concept que la séquence -.-p- - <oris le nost cocon
l'hydroryprolinc se trouve en position ITT '-sût être considéré comme présentant une éclnite caractéristique de la
Rnino
séquence o collagène. Bien que la r.lanine soit portée en abondance
thf-n hyiroyyproline Dans le collagène, et est un résidu commun
dans les régions non polrr, il est moins fréquent que n
hyfroyyproline en position TIT.
Ainsi, deux traits indiscutables du primaire
structure ou' collagène hr ve venir à la lumière. 1. Le
requenev du <11 peptide - lycine - proline *t si le
observation de Grassmann 1961 qui explique
35 o la molécule est acceptée, puis 9' o la proline
de collagène est dans cet arrangement, et il n'y a pas
question d'une distribution aléatoire de cet acide aminé.
2. la proportion élevée d'hydroyyproline dans le troisième
p- En dehors de ces deux observations, l'image de
la structure primaire du collagène émergeant de
informations obtenues à ce jour, est l'un des
h<térogénéité. La chaîne polypeptidique peut être divisée en
des régions polaires et cristallines distinctes à l'intérieur de la
ormères, la séquence d'acides aminés semble être assez
Aléatoire. 'il résulte de' Crassmann et. Al. (196) montrer
que dans les régions polaires les acides rmia^ polaires
eux-mêmes sont disposés d'une manière non ordonnée particulière.
sones pour correspondre au modèle de Vandins de l'électron
micrographies o' collagène. C'est difficile à expliquer,
considering th« spread of polar residues in the polar
Banding
is in fact a representation at the level of one a lino
acid restlue. If for example, collagen stained with
uronyl acetate is considered: there are approximately 75
side chains which will bind this stain in each o' the
constituent chains of tropocollagen (1 OO amino acids
Glutamic
glutamine and aspara ine). The banding pattern reed res
the presence o s nothing like 5'1 positions at which stain
is bound in the length o the molecule. Thus 3 x 75 * 22$
re s must give rise to Jb bru-s. /1th a proportion
bends arising ron tw or more aci ic or basic groups rt
a tine, as a result o either: (1) cl-^se proximity of
polar residues in the polypeptide giving no resolution o ‘
bands corresponding t each o^ them and (ii) the presence
or polar residues in corresponding positions on the
three constituent chains of tropocollagea? a so
non-staining o s me o t>e polar side chains due to
involvement in inter and intra-molt cola r ionic,
proportion or the banding pattern -.111 be due to single polar groups# This concept silovs for an essentially
random distribution of acidic
And *sslc
Involves a lower degree organisation of the so-called
polar regions, this is perhaps 'nore In keeping with the
present state of knowledge of the primary structure of
Collagen Is re larkaMo for its resistance to
proteolytic attack, only the highly apact ic enzyme
collagen' se brings about any large scale destruction
of th- molecule. There h-8 b-en a great deal o'
conjecture as to whether or not proteinases in general
hove any activity with collagen. 1 uhn et. Al. (19 >1)
maintained that trypsin degrades only tyrosine-containing
iopurities and that the collagen molecules remain
unchanged. Conversely Hodge et. Al. (i960) reported
that when soluble tropocollagen is treated with
proteolytic enzymes, extra-helical peptide *openiages
rre released which they term telopeptides. Concurrent
ith the release o telopeptldea, the interactions of
the molecule are moci*’ier thus Ibrous-Ion/-spacing
a/greg?tes can no Ion er bo formed but the ability to
om segm nt-long-s oacin» crystallites is unimpeire .
ubin et. ale (1963) cemonstrrte^ that pepsin liberates terminal or near terminal covalently
bon ed-peptides the amino acid composition o which is
quite di?'rerent ron that oc the residual major portion
0“ the molecule. hey observed that pepsin c inverts
m - r1 th < r! j I o(c'rw ‘ s, .• .<< 1 T . r
that the inter chain link Is external to the body o the
Grant find Album (196 ) showed that rat tall tendon
collagen coni be solu’ilised at p-i 7*L in the presence
o calcium salts or sallcllates by a variety o enzymes
including trypsin an 5 ehymotrypsin. Other chemicals
which eoul be present in in-vivo conditions e.g.
arginine an creatinine, enhanced this sola ilisation.
he significance of such in ings is di fic lit to
asses?, or rat-tail tendon colleger? is an unusually
soluble orm. However collagen is normally quite
insoluble at neutral pHs, so the solubilisation observed
in this work could be due to telop ptlde liber tion and
subsequent separation into -chains at the temperature
of the exp-rim nt (33°C) I.e. a combination o proteolysis
A picture o *
"hairy-rod", i.e. carryin a number o protru in: p< ptlde
chains hrs been put orward by ?oamus et. Al. (i960).
hey suggest that there are at least 1? places where
peptide chains 0 low molocular weight are sticking out
rrom the molecule, and that these chains are o ten almost
identical in amino acid sequence.
Thus the majority o inf motion is in avour o '
the concept that proteolytic enzymes find points of
attack in pepti e app-on ares o collagen> whilst the
main body of the triple-heliy is resistin’ to proteases,
suggest that the peptide appen ages mi ht be important
in connection with cr ssI Inking and end to en polymerisa
tion interactions of tropocollagen molecules.
Pretreatment with the enzyme <X -amylase at
has been used as a method for the solubilisation of
ox-hide collagen (Nishihara 19>3)* -teven (1961 ■) has
used the technique to extract collagen ron human
connective tissue and suggests that the enayoe destroys
covalent linkages which stabilise connective tissue
:owes and foss (19 3) and Grassoann anct Horaano
Aminé
(anger's
procollngen nowes and Moss foun. small anouns of
initrophenyl (D. ’•?•) aspartic acl end . ,!J. . alanine
which they thought must arise from extraneous matter, not
representing true terminal groups,
found significant amounts of K-teminrl residues in
Solub o
Aoles/1900
Aspartic Acid and D,#,P, Glycine of which D,?i.P. Glycine
represented 31 using the ,N,P, technique with procollng-n
Chan rarejan and Hose (1965)» using the phenyl
isothiocyanate nethod, found l.lo moles aspartic acid
• nd .^3 ool glycine per 1000 moles amino acl in
similar amounts o’ the same amino acids in insoluble
teven and Tristram (1962), by hydrolysing the
entire reaction mixture after dinitrophenylaMon of acid
soluble collagen, obtained D. P.
Derivatives of
Ino acids (
procedure would detect the N-terminal
Residues
which would otherwise le removed, by ./ashing o the . protein after dinitrophenylatlon. It was suggested that
these H-terminal derivatives originate from a collagen
non-protein nitrogen fraction which is not removed from
the material by normal purification procedures. C'était
found that the non-protein nitrogen could be more or less
completely removed by acetone precipitation or dialysis
at low pH, and It was postulated that the fraction was
Important in connection with the fibre forming interactions
:&Ue ?♦ rtapUtfl .rasVaaa .t, .-alaUft ■..^W an*
( rom Steven and Trlstra- 19 -2)
Just how ma iy K-ter linel residues are present in
collagen is rs much of a question no r ns It was ten years
ago. The non-proteIn-nitrogen fraction of teven and
obeerved by the numerous workers who have investigated this problem. Phe fairly constant amounts of
rlyclne and b.r2.P. aspartic acid observed by h3f lann et.nl
could easily bolon to bound peptides which are impossible
to remo e from the parent protein, no covalent linkages
Hermann et. Al. do not comment on the oi ni icance
' ' ■ .1 mol. ' • <x ' ' ^1. of amino acid residues, beyond saying that it is only
one tenth oc that expected if one amino end group occured
in each o** the three peptide chains of collagen. Sur le
basis of etermin tions of acetyl groups present in
collagen in act, they propose that the peptide chains
of collagen consist o' an average of siv subunits, whose
* mlno end groups are acetylated.
they could detect no end groups in insoluble college*,
but alkali treatm nt liberated amounts similar to those
they had estimated in soluble collagen* They took this
to indicate that the N-terminal residues of insoluble
collagen are masked by herose, and actually isolated end
characterised a glycopeptide from insoluble collagen
containin galactose and glucose. Again there was no
attempt to rrtlonalise the low yield of N-terminal amino
per molecular weight. Possibly th only logical
explanation^ i" it is assumed that glycine end aspartic
’•cid are present as terminal residues in the amounts
stated, and that the theories for the molecular weight
and subunit composition o'* collagen are accurate is
that the terminal residues if collagen are masked at
some stage subsequent to its 1ioaynthesis, possibly by
an enzymatic process, and that this larking is either
not always comolete or occurs over s relatively long
period of time co that in any preparation there are bound
t c y? mol cj1-s ' r e : ’1 : - r u s.
^isJ^ii&LUUz J2__ '.-Iral xiQuaa__ x-sjitaurtia*
A ’undauntal problem In 'he chemistry of collagen
are not ell equivalent that some of them rre not free t->
react with substituting reagents, while the majority can.
This question hrs come to light as a result of studies
usinr the dinitrophenyl technique on anger, mostly in
conjunction with investi ations of N-terminal residues as
described above, owes and Moss (1953) in th* ir
erneriments reported that V of the lysvl residues
appeared to not be avails'le to substitution by 1. laoro
2,b linitro ©nzeno ( ,D,M, • ) the rearent us d in tle
D.u,F, technique of Banker ( an er 19' 5). La réaction
medium used in this case was 70 ethanol plus Lh
saturated sodium bicarbonato, at room temperature*
Several forms of collagen and gelatin were investigated
• ut in no case did the degree o ' substitution exceed
70 . These workers pointed out that in the case of
gelatin and formic acid treated colleger., the D.f.P.
derivatives wore soluble, so the low < egr e or
substitution observe! cannot he due to a low rate of
reaction with an insoluble substrate. However they were
only able to detect a small amount o'* lysine in their
hy rol cates (V moles/10 0 amino acids) loavin approx,
1 moles/lT'h amino acid residues unaccounted or. Ce
was put forward V at -D.Tf.P. lysine Is iuc> less stal l
to acid hy rrlysis when combined In c llogen than then
present ns the free amino acid or In another ■ • .P.
hther workers to report incomplete substitution of
-lysyl groups were Holomons and Irving (1973) who
obtained 30 recovery of - . .r. lysine anI Hallsworth
(197k) v’ho quoted percentage aval labilities o k -7
for differ nt types o collagen aggregate, using
corrections based on hydrolytic recoveries of
lysine o'* B3.b - 94.9 ‘ as determined by control
experiments, hallsworth was also able to show that under
his conditions of reaction viz. aqueous medium pH 7.b
and 37°C, the degree o substitution was proportional
Mechanic and Lovy (1979) isolated the trln^ptl e
LL H - (glycyl- <*- ' - lysf.no r ' ^vl • > ’ v
ten'on. They postulated that the of lysine reported
to b© unassailable to • .K. • by Bowes and Hose 1953
may be present as J lysyl p ptides o this nature.
’owever It is a known act that un or certain conditions
o by rolysis peptide synthesis an J rearran ement can
occur, so it must ■ e considered unlikely that this p ptide
occurs in such large amounts if at all.
of the lysine of collagen Is substituted by . . . d»en the reaction is carried out in & denaturing medium
2.5H with respect to sodium perchlorate. The degree of
substitution was determined by separation of the basic
amino acids from the hydrolysate of the D.M.s. protein
on a column of amherlite 1 C5 • he results are given
fa-le 3. rom Hormann et. Al. 196J.
Analysis of basic amino acids 'rom normal and dlnitrophenylate soluble and Insoluble Collagen. Yields in mol./l > iol. acide aminé.
di nitrophenyl a ted d ired 2.5
asolu’ la Collagen. ■ ).O3 0. 7
d 1 nl t rophe ny 1 a t ed undenatured.
denatured HaCl 0.1" 0.1) 0.12 5.35
Heyns and /ol "f (195‘S) also suggest that with excess
bicarbonate an, denaturantc -lysyl residues o collagen
become more or less completely substitute'. Beaucoup d'autres
workers h -ve recorded a whole range o" availabilities
a variety of reagents, for . lysyl residues. Leach (1966)
rives vislues or substitution b potassium cyrnate
from bo * 99 and VJ - 93 resp ctlvely. Harding (1966)
in a very complete survey of the subject gives data on
reactivity of l-lysyl groups to many reagents including
1-acetylation, ' enzoylation, benzenesulphonylation,
succinylatlon, guani inrtion, so lum bromoacetate,
2, k dinitro benzene, nitrous acid, nitr^syl c dori e, ninbyrin rnd trypsin. The figures vary enormously hut
some are very hi -h including 100 ‘or acetylation.
In the race of this wealth of information, one must
conclude that the -lysyl groups of collagen
region of 100 free or substitution reactions. Peut-être
In native collagen, some steric hindrance or ionic bonding
prevents complete reaction with some reagents, but in most
cases this can be overcome by denaturetion or increasing
the molarity of the solution. The act that ionic
strength hrs such an effect on reaction of ..-lysyl
resi ues with .T.H. could incicrt© th't this orm of
m( aking is in fact due to ionic bonding of these residues
rather than a purely steric ef. act and that th©
observations In connection with denaturing agents could
also arise ’rom a simple increase in ionic strength causing
the enhanced availability.
The orperiments used in estlm? tiny, the reactivity of
-lysyl groups, in general ere not sufficiently sensitive
two ner molecule) -lysyl groups In covrlent llnkeges. These, whilst few in number, could bo highly importantF r features o the molecule* Thus the tri pen
Tide o"
Mechanic and Levy cannot te completely ruled out.
’’ranxblau (1962) produced evidence in favour o' the idea,
when he found that 12 o the lysine of a colla&enrs©
igest o 1< 1, is not free to react with . j
masking in such small p ptides is unlikely to be anything but covalent, although here egain ionic linkages could
Contradictoire
this theory came from the work of Hormann
they actually estimated the free lysine in hynrolysetes
o T.N.P. collagen. Their figure of only . 'nl./l
mol. amino acid (see Table 3) corresponds to 2.1 lysine
Residues
3001*' <), so the hypothesis is not completely ruled out,
although of course this tiny ©mount
Have originated i rom
Lockhart and Abraham (1956), reported that -lysyl
peptides are extremely stable to acid by rolyais, having
^ound that on ^3 hrs. hydrolysis with 11 • MCI
At 3'^C
There was
Aspartic acid from an
-lysyl peptide o' the two amino acids. This could be a
special case the proximity of two free carboxyl groups
to the peptide bonds would tend to repel protons and
.4 characteristic o all -lysyl peptide bonds. However, if this stability is a property o' all
-lysyl
estinrtions of free lysine in hydrolysates of I .f.P.
proteins would be subject to considerable errors, and the
results o experiments sue as those
Of Horman
would be misleading* This is only a remote possibility,
The possibilities or covalent linkages Involving
Numerous*
hypothesis for crosslinkin: between the polypeptide
chains o collagen, by N-glycosyl linked carbohy rrte
residues taking on the *orm of a Schl f-base, and thought
that tho . amino group of lysine would form the amino
group donors in this system.
Harding
Possible
structures in which the & amino groups o lysine could
participate se igure 1. He pointed ou that in the
letter case (straight chain li) the lysine residue
e-tlons Into the ^-terminal amino /cids or collagen. Cette
is not completely true: with Sa iger’s technique the
lysine, which is a er soluble. he derivative o' lysine
-lysyl bon I would be the unusual
Possible hhkAggs wok/mj £-li^i txtrnwo ^rpu^S ,
CO— CH—NH--- — CO- Jh«nh2„ brtn&h ArtrA IS tirrrurtAL X
CH — CO---NW- CH — Co---NH — C.W — Co&H
NH rco - r
HH2- OH-CO---NW - CH— Co---NH-Crt-CoOW
6) M —CH — co--- NH&K^)— ”*NH---CH’NH^
C'li^ hh^CH-Co ----UH-CtHj), Cii'W--- Nrt CH'CcM
lysine would almost certainly escape detection in the
aqueous nhase of an analysis of a I.K.P. protein
hydrolysate, due to the large excers v
which would also be present.
_______ 'UnKMia*
Bl arable number o X * glutamyl
Collagène
Al. (1957) ©s a result o experiments using the thiohydmt In
méthode. The Investigations were n:*t quantitative but were
taken o indicate the pr A
Rearrangement
O( B d land
proprlonlc acids respectively. In the gelatin obtained rom lchtyocol, the formation o' these compounds wa3 noted
as well ns a decrease in glutamic acid and aspartic acid,
an the tor nation o' succinic seiial lehy e and ammonia. '
criticism o this work was thet the anhydrous med1 urn used
coul-i promote ring closure by the o carboxyl groupst with
Su (1962) and ransbli
[ Prom GaMojo 0^ • 14&O-)
e0__ Mont aw/flc2o
je ---CCrl^') n gsl'e.riPiCtu't’ion
CcHx) n. ---> CC1r/) m je kO*C 30m»n. NR - CH- co - NH
R.
C’H 2. 1 CH 2
hy irorauic acids from unoo i led proteins In aq eous conditions. Using water soluble 1 - cycloheyyl - 3
C - >rph n/1 * (' ) et’ •>> * c” ' Mil il c
o-toluone sulphonate at pH** and 25°C in an aqueous
medium, they suggested that there
Aurait
Leur
O peptide
Pris en considération
0< ?00 ’ rsi^? s V'' : >u . if' n polypep I I rsw&c^* I’U'^ovl r rt •
linkages, the reactions and equilibria in cigur© 3 ®1<I
be ©rived un or certain conditions. Curtis and : pikes
(1962) have shown that carlolmi .es catalyse the oration
of peptide linkages without themselves bein involved., and
so th© glutsrimide ring system could be formed in this
fashion, fristram also re erred to work ty 1ovecs et.
Al. (1953) on the Hofmann degradation o polyanhydro
aspartic acid, which showed that this polymer opens to
X - glutamyl linkages ere present in c
substantial numbers, rs ^ranablsu suggests, then the two methylene groups Introduced into the polypentide
